Diagnóstico Serológico de Tuberculosis

Utilización del antígeno P32 y el antígeno SLIV, para el diagnóstico
rápido y precoz de la tuberculosis por la serología (ELISA) en el
Hospital Regional IHSS en San Pedro Sula, Honduras
Dubón J. M.*, L. Rigouts**, Portaels Franqoise*
RESUMEN
Hemos examinado 148 muestras de suero provenientes
de enfermos sufriendo de tuberculosis pulmonar (examen
directo del esputo positivo) y extrapulmonar
(ganglionar). De esos mismos pacientes, la serología
VIH fue efectuada.
Según los resultados de la serología ELISA P32 y el
antígeno sulfolipídico SL IV, la sensibilidad de la prueba
donó valores muy bajos, de 48.6% para el antígeno P32
y 21.4% para el SL IV. La especificidad de la prueba fue
de 76.9% para el antígeno P32.
RESUME
Nous avons testé 148 échantillons de serums provenant
de malades atteints de tuberculose pulmonaire (examen
direct du crachat positif) et extrapulmponaire
(ganglionnaire). Parmi ees mémes patients nous avons
fait la sérologie VIH. Les résultats de la sérologie ELISA
O32 et l'antigéne sulpholipide SL TV, concernent leur
sensibilité et leur spécificité. Des valeurs tres basses ont
Patólogo Clínico y Microbiólogo Médico, Hospital Regional
IHSS, San Pedro Sula, Honduras.
Departamento de Microbiología, Instituto de Medicina
Tropical, Prince Leopold, Ambires, Bélgica.
été trouvées (sensibilité de 48.6% pour la P32 et 21.4%
pour le SL TV. La spécificité était de 76.9% pour la P32).
Palabras Claves. Antígeno Proteína P32, Antígeno
Sulfolípido IV, ELISA, VIH, Tuberculosis.
INTRODUCCIÓN
Las muestras que hemos examinado fueron provenientes
de enfermos sufriendo de tuberculosis pulmonar o
extrapulmonar (ganglionar diagnosticada por la
clínica de neumología y el laboratorio (examen
directo de esputo o biopsia), en el hospital del Seguro
Social en San Pedro Sula. Esta es la segunda ciudad
de Honduras, donde la incidencia de la tuberculosis
pulmonar fue de 9 por 10,000 habitantes en 1991.m
Los resultados que hemos obtenido por la serología
utilizando como antígeno la proteína p32 puede tener
un interés para la serología de la tuberculosis, como
condición de poder aumentar la sensibilidad del examen.
Otra de las investigaciones sobre la utilización de
diferentes antígenos lipídicos (lípidos purificados de
M. tuberculosis y lípidos sintéticos) hemos también
realizado la determinación de los anticuerpos VIH por
el método de aglutinación serodia (kit comercial), en
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Alguna de las muestras para hacer una comparación
entre los sujetos infectados por el virus VIH y la
serología de tuberculosis positiva.
MATERIAL Y MÉTODOS.
Material Los sueros
En el estudio todos los pacientes afectados por la tuberculosis
pulmonar y extrapulmonar, fueron casos
nuevos diagnosticados en el servicio de Neumología
del Hospital. Hemos incluido entre los controles, los
pacientes no tuberculosos pero presentando otra
patología tropical, para ver la existencia o no de
reacciones cruzadas. Los controles sanos fueron también
recolectados en el laboratorio de transfusión sanguínea
del hospital.
Todas las muestras de suero fueron enviadas en tubos
nunca a los cuales se les agregó azida de sodio al
0.01% según el método recomendado por F.
Portaels, Micobacteriología IMT enviados al Instituto de Medicina Tropical de
Amberes, Bélgica por correo. A su llegada todos
fueron guardados a -20 °C, antes de ser analizados.
Las 148 muestras de sueros pueden ser subdivididos en
4 grupos, según su procedencia, (cuadro 1).
GRUPO I.
a) 93 pacientes afectados de tuberculosis pulmonar,
VIH + = 22, VIH (-) = 30. VIH no efectuados = 41.
b) 3 pacientes afectados de tuberculosis
extrapulmonar, (ganglionar), VIH (+) = 2, VIH (-) = 1.
GRUPO II.
40 pacientes controles sanos.
GRUPO III.
12 pacientes afectados de enfermedades tropicales
como la tripanosomiasis (enfermedad de Chagas).
VIH (-).
NT = No examinados TB=tuberculoso Los
Antígenos
a) La P32, antígeno proteico ha sido purificado por J.
De Bruyn en el Instituto Pasteur de Brabant y ha
sido enviado al laboratorio de Micobacteriología
del Instituto de Medicina Tropical. Se trata de un
antígeno proteico identificado como Ag. 85 dentro
de sistema de referencia BCG (Bacilo de Calmette)
í3'1). Es purificado a partir de filtrados de cultivos
de M. bovis BCG privados de Zinc.
b) El sulfolípido SL TV es un antígeno lipídico, las
investigaciones efectuadas con los antígenos
lipidíeos han sido efectuadas con el sulfolípidos
IV, aislado del M. tuberculosis por cromatografía
efectuado por F. Papa, en el Instituto Pasteur de
París (5). Se trata del sulfato 23 diacyl trehalosa-2'
(6), su interés por el serodiagnóstico de la tubercu
losis ha sido revelado por los trabajos de Craud y
Colab. (s).
A fin de comparar la sensibilidad del ELISA-SLIV
y el ELISA P32, hemos efectuado los exámenes
utilizando los sueros positivos por ELISA P32, es
decir 14 sueros de pacientes con tuberculosis
pulmonar.
Método ELISA P32
Antígeno
El antígeno purificado en el Instituto Pasteur de Brabant
es utilizado para efectuar el coating de las placas
REVISTA MEDICA HONDUREÑA - VOL. 61 -1993
Los controles con infecciones tropicales como la
tripanosomiasis son en número de 12. Dentro de este
grupo, 10 casos son negativos a la P32, contra 2 casos
falsos positivos, sea una especificidad de 833%.
Los resultados obtenidos por los diferentes autores
sobre la investigación de anticuerpos IgG, por el
método ELISA han sido efectuados con antígenos
diferentes y sobre grupos de enfermos y controles muy
variables.
La sensibilidad del test ELISA varía de 51% a 97.5% en
función de la localización de la tuberculosis y del
antígeno utilizado. Las especificidades obtenidas por
los autores varían también de 31.8% a 100%.
En nuestro estudio hemos obtenido una sensibilidad de
47.5% por todos los tuberculosos. Los resultados parecen
ser variables, con el antígeno P32 Turneer y Col. (11) han
encontrado una sensibilidad de 63% en los infantes con
una tuberculosis pulmonar en Bélgica (11), mientras que
los resultados obtenidos en Burundi í2), 51% de
sensibilidad son comparables a los encontrados en
nuestro estudio. En las regiones de alta prevalencia, los
casos llegan en un estado avanzado de enfermedad, con
una taza muy elevada de anticuerpos. La pérdida de
sensibilidad del examen podría explicarse por una
pérdida de actividad antigénica del antígeno P32 seguido
de una mala conservación o pérdida de anticuerpos
debido a la congelación de las muestras y a la adición de
azida de sodio.
A fin de verificar la influencia del modo de conservación
de los sueros sobre la pérdida eventual de anticuerpos
antituberculosos, proponemos comparar los resultados
obtenidos con sueros conservados a + 4 °C sin azida y
los mismos sueros sin adicionarles azida. La taza de
anticuerpos será en cada caso examinada antes y después
de la congelación a - 20 °C.
La especificidad mencionada dentro de la literatura
varía de 31.8% a 100% en función del antígeno utilizado
del lugar de estudio y sobre todo de los grupos controles
utilizados, ZattayCol. (12) encontraron una especificidad
de 90%, como Kiran y Col. (13) en India y Turneer y Col.
(11) en Bélgica utilizando todos los controles de pacientes
sanos, y respectivamente los antígenos PPD y P32.
Nuestro estudio muestra una especificidad de 75%
utilizando como grupo control pacientes sanos. Por el
contrario, si se utiliza como controles sujetos sanos y
pacientes con una infección no tuberculosa, la
especificidad encontrada fue de 76.5%.
Esta investigación ha sido efectuada para conocer la
existencia de reacciones cruzadas como lo había
observado Zattlatl2). Como sabemos que a nivel de la
membrana de las bacterias, existen las proteínas de
"choque" que, cuando la bacteria se encuentra en
período de "stress", seguido a una agresión exterior,
induce la producción de anticuerpos no específicos.
TRABAJO CIENTÍFICO ORIGINAL 49
En ese caso el problema viene a ser más complicado
para el método serológico y hay que pensar en el uso de
anticuerpos monoclonales.
En nuestro estudio no observamos reacciones cruzadas
con la enfermedad de Chagas.
Por las tuberculosis pulmonares activas, Torgal y Col.
(11) que utilizan como antígeno, el glipídico fenólico
PGL-TB1, obtiene una sensibilidad de 97.5%, mientras
que Crauad y Col. m obtiene una sensibilidad de 59%
con el antígeno lipídico SL IV que es un sulfolípido.
Nuestra sensibilidad es muy baja (21.4%), comparada a
la obtenida con la P32. A primera vista pareciera que el
test ELISA SL IV sea menos sensible que el test ELISA
P32. Sería por lo tanto mucho mejor de examinar un
mayor número de sueros antes de obtener conclusiones
definitivas.
De una manera general, sería interesante analizar varias
centenas de muestras de sueros dentro de una población
muy grande. Habría también de determinar si el antígeno
P32 pierde su actividad durante un período determinado
y si la conservación y transporte 4e sueros ejercen una
influencia sobre la taza de anticuerpos IgG medidos.
La infección VIH no influye en la sensibilidad del test
ELISA P32. Estos resultados concuerdan con aquellos
obtenidos precedentemente con el Antígeno 60<8 br="" estos="">resultados son importantes porque la tuberculosis está
asociada a la infección VIH, en las regiones donde la
prevalencia de las dos infecciones es elevada.
Esta asociación debe de estar presente en los clínicos
que deberán pensar en la posibilidad de una tuberculosis
en todo paciente VIH(+) e inversamente, en una infección
VIH en todo paciente al cual un diagnóstico de tuberculosis
es efectuado. La puesta en ruta de un tratamiento
precoz, es por lo tanto más importante ya que la
enfermedad es contagiosa.
CONCLUSIONES
La sensibilidad y la especificidad han sido estudiadas
en 14 sueros provenientes de Honduras. Se trata de 93
muestras de pacientes con tuberculosis pulmonar, 3
pacientes con tuberculosis extrapulmonar(ganglionar).
12 muestras de pacientes con enfermedad de Chagas y
40 muestras de controles sanos.
El estudio de la sensibilidad con la prueba ELISA P32,
donó valores de 48.6 % para la tuberculosis pulmonar y
33% para la tuberculosis extrapulmnar. Estos dos valores
son muy bajos considerando que en el país la prevalencia
de la enfermedad es elevada.
La especificidad de la prueba ELISA P32 es de 75% para
los controles sanos, esto corresponde a los resultados
obtenidos en otros estudios, por lo tanto en nuestro
estudio, la especificidad no es influenciada por la
enfermedad de Chagas. La sensibilidad de la prueba
ELISA SL IV es muy baja (21.4%), comparada con la
encontrada con la P32 (48.6%).
Es posible que estos valores muy bajos de sensibilidad
sean debidos a una pérdida de anticuerpos unida a los
modos de conservación de los sueros. Deben de
compararse diversos modos de conservación de sueros
a fin de elucidar este problema.
Dentro de las condiciones de nuestro trabajo, la serología
de la tuberculosis no parece presentar una ventaja
comparado al diagnóstico clásico de la enfermedad por
el examen directo.
AGRADECIMIENTO
Este trabajo se llevó a cabo gracias a la colaboración de
la Fundación Padre Damien de Bruselas, Bélgica.
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